PACE4 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-405605-LAC-2

Das humane Gen PCSK6 kodiert die Proprotein-Konvertase PACE4, eine calciumabhängige Serin-Endoprotease, die sekretierte und an der Zelloberfläche lokalisierte Vorläuferproteine an Motiven mit basischen Aminosäureresten prozessiert, um reife, bioaktive Faktoren zu erzeugen. PACE4 trägt zur posttranslationalen Aktivierung von Wachstumsfaktoren, Metalloproteinasen, Rezeptoren und adhäsionsbezogenen Proteinen bei und verknüpft die PCSK6-Aktivität damit mit dem Umbau der extrazellulären Matrix, der Zellmigration und entwicklungsbiologischen Signalnetzwerken, einschließlich TGF-β-/BMP-assoziierter Signalwege. Eine fehlregulierte PCSK6-Expression oder -Aktivität wurde mit aberranter proteolytischer Prozessierung in der Krebsbiologie, fibrosebedingtem Gewebeumbau und kardiovaskulären Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Rolle bei der Regulation parakriner Signalgebung und von Proteasekaskaden widerspiegelt. Störungen von PCSK6/PACE4 werden daher in Geneditierungs- und funktionellen Genomikstudien genutzt, um die konvertaseabhängige Substratreifung, die Proteostase im sekretorischen Weg sowie nachgeschaltete Veränderungen in Invasion, Differenzierung und entzündlichen Signalantworten zu untersuchen.

PACE4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PCSK6-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PACE4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PCSK6-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PACE4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PCSK6-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.