PACAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (r): sc-437378

概要

下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（PACAP；Adcyap1）は保存性の高い神経ペプチドであり、主にPAC1受容体を介してシグナルを伝達し、VPAC受容体にも作用してcAMP/PKAおよびMAPK/ERK依存的な転写を調節します。ラットの神経系および神経内分泌系において、PACAPは神経細胞の興奮性、神経伝達物質放出、ストレス軸のシグナル伝達、さらに神経突起伸長や細胞生存を含む発生プログラムを調節します。PACAPに駆動されるシグナルはカルシウム恒常性、シナプス可塑性、炎症性メディエーターの調節とも交差しており、この経路は疼痛処理、ストレス関連行動、神経炎症に関わる機構と結び付けられます。PACAP活性の破綻は自律神経系および代謝制御の変化と関連づけられており、片頭痛様表現型や神経変性への脆弱性のモデルにおいても検討されています。

PACAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）は、rat細胞株における遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PACAPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PACAPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PACAPの機能に不可欠なエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PACAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）およびPACAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r2）によってコードされるgRNAは、遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PACAP HDRプラスミド（r）および PACAP HDRプラスミド（r2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定の標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。