PACAP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419000

Panoramica

Adcyap1 codifica il polipeptide attivante l’adenilato ciclasi ipofisaria (PACAP), un neuropeptide conservato che segnala principalmente attraverso PAC1 (ADCYAP1R1) e recettori GPCR di classe B correlati, regolando le vie cAMP/PKA, MAPK/ERK e del Ca²⁺ intracellulare. Nei tessuti murini, PACAP modula la neurotrasmissione, lo sviluppo del sistema nervoso, la secrezione neuroendocrina e le risposte cellulari allo stress, influenzando la plasticità sinaptica, l’omeostasi circadiana e ipotalamica e la regolazione autonomica. La segnalazione di PACAP interseca programmi infiammatori e metabolici, modulando il rilascio di citochine e le vie di segnalazione della sopravvivenza cellulare nei compartimenti neurali e periferici. In letteratura, la deregolazione dell’asse ADCYAP1/PACAP è stata collegata alla neurobiologia dello stress, all’elaborazione del dolore e a meccanismi neuroinfiammatori, a supporto di studi meccanicistici in contesti del sistema nervoso e rilevanti per l’immunità.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PACAP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adcyap1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adcyap1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adcyap1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PACAP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adcyap1 per lo studio della segnalazione di PACAP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adcyap1 critici per la funzione di PACAP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adcyap1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PACAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PACAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adcyap1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PACAP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PACAP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adcyap1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adcyap1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.