Plasmide CRISPR d'Activation (h) PA28β: sc-403643-ACT

PSME2 code pour PA28β, une sous-unité centrale du complexe activateur du protéasome PA28 (11S), qui se lie au protéasome 20S et favorise le traitement des peptides de manière indépendante de l’ubiquitine. En accélérant le renouvellement protéasomal et en modulant les répertoires peptidiques, PA28β contribue au traitement des antigènes et à leur présentation par le CMH de classe I, reliant la protéostasie à la surveillance immunitaire. Cette activité recoupe des voies dépendantes de l’interféron, la gestion du stress oxydatif et la régulation du contrôle qualité des protéines dans le cytosol et le noyau. Une activation dérégulée du protéasome et une présentation antigénique altérée ont été associées à des états de signalisation inflammatoire et à l’immunobiologie tumorale, ce qui fait de PSME2 un nœud pertinent pour des études mécanistiques dans ces contextes.

PA28β Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSME2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PA28β Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSME2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSME2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PA28β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSME2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PA28β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PA28β dans les cellules tumorales présentant une expression de PSME2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.