Plasmide Double Nickase (h) p73: sc-416822-NIC

TP73 code pour p73, un facteur de transcription de la famille p53 qui régule le contrôle du cycle cellulaire, l’apoptose et les programmes de différenciation en réponse au stress cellulaire et aux signaux du développement. Par des activités spécifiques à ses isoformes, p73 influence la signalisation des dommages à l’ADN, l’apoptose mitochondriale et des réseaux transcriptionnels qui gouvernent l’intégrité épithéliale et le développement neuronal. La fonction de p73 s’inscrit à l’interface de voies telles que les réponses médiées par ATM/ATR et la régulation croisée au sein de la famille p53, modulant des issues incluant la sénescence et la survie. Une expression dérégulée de TP73 ou un déséquilibre entre isoformes a été associé à des processus oncogéniques, à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une adaptation altérée au stress, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel.

p73 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TP73 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TP73. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TP73. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TP73.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.