Plasmide CRISPR d'Activation (h) p73: sc-416822-ACT

Le gène humain **TP73** code p73, un facteur de transcription de la famille p53 qui régule les décisions de destinée cellulaire, notamment l’arrêt du cycle cellulaire, l’apoptose, la différenciation et la sénescence. Grâce à une transactivation des gènes cibles dépendante du contexte, p73 intègre les réponses au stress et influence la signalisation des dommages à l’ADN, les programmes d’apoptose mitochondriale et les voies du développement. La diversité des isoformes (TAp73 et ΔNp73) peut orienter les profils transcriptionnels vers des états pro-apoptotiques ou pro-survie, façonnant l’intégrité épithéliale et le développement neuronal. Une activité de TP73 dérégulée et un déséquilibre des isoformes sont fréquemment étudiés en biologie du cancer, dans les troubles du neurodéveloppement et les mécanismes de chimiorésistance, car ils modulent des réseaux transcriptionnels et la stabilité génomique.

p73 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TP73 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

p73 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TP73 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TP73, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de p73. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TP73 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de p73 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie p73 dans les cellules tumorales présentant une expression de TP73 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.