Plásmido Doble Nickase (h) p57 Kip2: sc-400444-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)p57 Kip2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa p57 Kip2 (h) y el plásmido de doble nickasa p57 Kip2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CDKN1C. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: p57 Kip2 Anticuerpo (KP39): sc-56341
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) p57 Kip2 | sc-400444-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) p57 Kip2 | sc-400444-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKN1C codifica el inhibidor de quinasas dependientes de ciclina p57 Kip2, un regulador negativo clave de la progresión G1/S que limita la actividad de las CDK para imponer la salida del ciclo celular y apoyar la diferenciación. Como gen improntado expresado predominantemente desde el alelo materno, CDKN1C ayuda a coordinar programas de crecimiento durante el desarrollo y la homeostasis tisular, y se intersecta con vías que gobiernan la proliferación, la apoptosis y el compromiso de linaje. La expresión o función alteradas de CDKN1C se asocian con un control del crecimiento desregulado y se han implicado en fenotipos de sobrecrecimiento del desarrollo y en la biología tumoral, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar los puntos de control del ciclo celular. En células humanas, p57 Kip2 también se vincula a estados tipo senescencia y a respuestas dependientes del contexto frente a señales mitogénicas y al estrés.
p57 Kip2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDKN1C en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDKN1C. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDKN1C. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDKN1C alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.