Plasmide Double Nickase (h) p53: sc-416469-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) p53 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide p53 Double Nickase (h) et le plasmide p53 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TP53. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: p53 Antibody (DO-1): sc-126
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) p53 | sc-416469-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) p53 | sc-416469-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TP53 code la protéine suppresseur de tumeur humaine p53, un facteur de transcription spécifique de séquence qui intègre les signaux de stress cellulaire afin de coordonner les réponses aux dommages de l’ADN, l’arrêt du cycle cellulaire, la sénescence et l’apoptose. L’activité de p53 est régulée par des modifications post-traductionnelles et par un contrôle en rétroaction via l’axe MDM2, et elle module des voies comprenant les points de contrôle G1/S et G2/M, la recombinaison homologue et la réparation par excision de nucléotides. La perturbation de la fonction de TP53 altère la stabilité génomique, les décisions de destin cellulaire et les programmes transcriptionnels associés à la transformation oncogénique. TP53 figure parmi les gènes les plus fréquemment altérés dans les cancers humains, faisant de p53 un nœud central pour l’étude de la signalisation du stress, du maintien du génome et de la biologie tumorale.
p53 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TP53 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TP53. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TP53. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TP53.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.