Plásmido CRISPR de Activación (h) p53: sc-416469-ACT

TP53 codifica el supresor tumoral humano p53, un factor de transcripción específico de secuencia que integra la detección de daño en el ADN, el estrés oncogénico y los puntos de control del ciclo celular para mantener la estabilidad genómica. p53 regula programas que controlan el arresto en G1/S y G2/M, la apoptosis, la senescencia y la reparación del ADN a través de vías canónicas que implican la señalización ATM/ATR y dianas transcripcionales como CDKN1A (p21), BAX y MDM2. La alteración de la función de TP53 es frecuente en el cáncer y se asocia con respuestas al estrés modificadas, inestabilidad cromosómica y una amplia reprogramación transcripcional. Como nodo central de la biología del estrés celular, p53 se estudia extensamente en mecanismos de transformación, resistencia al estrés genotóxico y el entrecruzamiento de vías con la señalización PI3K–AKT y MAPK.

p53 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TP53 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

p53 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TP53 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TP53, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de p53. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TP53 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de p53 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía p53 en células tumorales con expresión de TP53 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.