P4HA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405566

概要

P4HA2は、コラーゲンやその他の細胞外マトリックスタンパク質に含まれるプロリン残基の水酸化に必須な小胞体内酵素であるプロリル4-ヒドロキシラーゼの触媒サブユニットα2をコードします。この翻訳後修飾は、三重らせん構造の適切な折りたたみと安定化を促進し、P4HA2の活性をコラーゲン生合成、小胞体におけるタンパク質品質管理、ならびに細胞外マトリックスの構築と組織化に結び付けます。マトリックスの沈着とリモデリングにおける役割を通じて、P4HA2は細胞—マトリックス相互作用、組織の硬さ、微小環境による細胞挙動の制御に関連する経路でしばしば研究されています。P4HA2の発現異常は線維化リモデリングや腫瘍関連ストローマの変化と関連づけられており、マトリックス駆動性の表現型に関する機序研究において重要な標的となっています。

P4HA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるP4HA2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、P4HA2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、P4HA2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、P4HA2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、P4HA2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、P4HA2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• P4HA2の機能に不可欠なP4HA2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、P4HA2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• P4HA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびP4HA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、P4HA2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  P4HA2 HDRプラスミド（h）および P4HA2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはP4HA2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のP4HA2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。