Plásmido CRISPR de Activación (m) p41-ARCb: sc-419207-ACT

Arpc1b codifica p41-ARCb, una subunidad del complejo ARP2/3 que promueve la nucleación y ramificación de actina necesarias para la remodelación dinámica del citoesqueleto en células de ratón. Al favorecer la formación de lamelipodios, la endocitosis y el tráfico vesicular, p41-ARCb contribuye a procesos como la migración de células inmunitarias, la fagocitosis y la señalización dependiente de la adhesión. Las redes de actina impulsadas por ARP2/3 interactúan con vías de GTPasas de la familia Rho y con reguladores posteriores de la polaridad y la motilidad celular. La desregulación del ensamblaje de actina asociado a ARPC1B se relaciona con alteraciones de la función inmunitaria y fenotipos inflamatorios, por lo que resulta relevante para estudiar las contribuciones del citoesqueleto a la defensa del huésped y a la homeostasis tisular.

p41-ARCb El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Arpc1b sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

p41-ARCb El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Arpc1b en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Arpc1b, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de p41-ARCb. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Arpc1b y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de p41-ARCb en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía p41-ARCb en células tumorales con expresión de Arpc1b silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.