P2Y5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405189

概要

LPAR6（P2Y5とも呼ばれる）は、リゾホスファチジン酸（LPA）に応答するGタンパク質共役受容体（GPCR）をコードしており、ヘテロ三量体Gタンパク質を介した細胞内シグナル伝達を調節します。P2Y5の活性はRho/ROCK系およびMAPK系に関連する経路に影響し、状況依存的に、細胞骨格の再構築、細胞間接着、細胞運動性を協調的に制御します。本受容体は皮膚および毛包の生物学において重要な役割が示唆されており、LPAR6シグナルの変化は先天性の毛髪成長異常や、より広範な上皮恒常性に関わる表現型と関連しています。さらに、LPAR6を介する脂質シグナルは炎症やバリア機能関連のプロセスとも交差するため、ケラチノサイトをはじめとする上皮モデルにおける作用機序研究に有用です。

P2Y5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるLPAR6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、LPAR6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、LPAR6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、P2Y5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、P2Y5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、LPAR6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• P2Y5の機能に不可欠なLPAR6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、LPAR6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• P2Y5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびP2Y5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、LPAR6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  P2Y5 HDRプラスミド（h）および P2Y5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLPAR6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLPAR6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。