P2Y2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422096
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- P2Y2 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico P2Y2, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:P2Y2 Anticorpo (H-5): sc-518121
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
P2Y2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422096 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
P2ry2 codifica o receptor P2Y2 de camundongo, um receptor purinérgico acoplado à proteína G ativado por ATP e UTP extracelulares. A sinalização de P2Y2 acopla-se principalmente a Gq/11 para estimular a fosfolipase C, a produção de fosfatos de inositol, a mobilização de Ca²⁺ intracelular e o engajamento a jusante das vias MAPK e PI3K/AKT, moldando respostas transcricionais e do citoesqueleto. Por meio da regulação do transporte iônico, da quimiotaxia e da secreção, o P2Y2 contribui para a fisiologia da barreira epitelial, respostas endoteliais e sinalização imune inata em microambientes inflamatórios. A sinalização purinérgica desregulada envolvendo P2Y2 tem sido associada à inflamação das vias aéreas e intestinal, ao remodelamento relacionado à fibrose e a interações estromais e imunes associadas a tumores, sustentando sua relevância em estudos de mecanismos de doença.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO P2Y2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene P2ry2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do P2ry2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do P2ry2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína P2Y2.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de P2ry2 para a investigação da sinalização de P2Y2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) P2ry2 críticos para a função P2Y2
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos P2ry2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo P2Y2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo P2Y2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus P2ry2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo P2Y2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR P2Y2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia P2ry2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo P2ry2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.