P2Y11 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405745

Visão geral

P2RY11 codifica o recetor humano P2Y11, um recetor acoplado à proteína G responsivo a ATP/UTP que, de forma singular, se acopla tanto à sinalização via Gq como via Gs. Após estimulação por nucleótidos extracelulares, o P2Y11 promove a ativação da fosfolipase C com mobilização intracelular de Ca²⁺ e eleva os níveis de cAMP, integrando sinais purinérgicos com as vias MAPK/ERK e outras vias de segundos mensageiros que moldam a ativação de células imunitárias e programas de citocinas. O P2Y11 é expresso em múltiplas populações de leucócitos e está implicado na regulação de respostas de células dendríticas, monócitos e células T em microambientes inflamatórios. A desregulação da sinalização purinérgica envolvendo o P2Y11 tem sido associada a fenótipos inflamatórios e autoimunes, sustentando o seu estudo em modelos de imunometabolismo, neuroinflamação e interação tumor–sistema imunitário.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO P2Y11 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene P2RY11 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do P2RY11, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do P2RY11 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína P2Y11.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de P2RY11 para a investigação da sinalização de P2Y11, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) P2RY11 críticos para a função P2Y11
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos P2RY11 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo P2Y11 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo P2Y11 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus P2RY11. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo P2Y11 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR P2Y11 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia P2RY11 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo P2RY11 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.