Plásmido Doble Nickase (m) P2X7: sc-422093-NIC

El gen murino **P2rx7** codifica el canal catiónico **P2X7** activado por ATP, un receptor purinérgico trimérico que media la entrada de **Na⁺** y **Ca²⁺** y la salida de **K⁺** en respuesta a concentraciones elevadas de ATP extracelular. La señalización de P2X7 favorece la activación del inflamasoma, el procesamiento de **IL-1β**, la permeabilización de la membrana y vías inflamatorias aguas abajo, incluidas **NLRP3**, **MAPK** y **NF-κB**, influyendo en la liberación de citocinas y en programas de muerte celular. En células inmunitarias y gliales, P2X7 ayuda a acoplar señales de peligro asociadas al ATP con la activación microglial, las funciones efectoras de los macrófagos y la regulación de la proliferación y la apoptosis. La actividad desregulada de P2X7 se ha implicado en la neuroinflamación, la patología autoinmune, mecanismos de dolor crónico y la inflamación asociada a tumores, lo que convierte a **P2rx7** en un objetivo ampliamente estudiado en modelos de inmunología y neurociencia.

P2X7 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus P2rx7 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de P2rx7. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de P2rx7. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con P2rx7 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.