P2X2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403517-ACT

Das humane P2RX2-Gen kodiert den ATP-gesteuerten P2X2-Rezeptor, einen trimeren, nichtselektiven Kationenkanal, der als Reaktion auf extrazelluläre Nukleotide einen schnellen Na⁺/Ca²⁺-Einstrom vermittelt. Die P2X2-Signalgebung formt die Membranerregbarkeit, Ca²⁺-abhängige Second-Messenger-Signalwege und aktivitätsabhängige Transkription in Neuronen und sensorischen Epithelien und beeinflusst dadurch synaptische Übertragung, Neurosekretion und sensorische Verarbeitung. Dieser purinerge Rezeptor beteiligt sich an der ATP-getriebenen Kommunikation bei Gewebestress und Entzündung und ist in umfassendere neuroimmunologische Signalkommunikationsnetzwerke eingebunden. Eine veränderte P2RX2/P2X2-Funktion wurde mit sensorischen und neurologischen Phänotypen in Zusammenhang gebracht, was seine Untersuchung im Kontext der Mechanismen auditiver und nozizeptiver Signalgebung sowie verwandter, für Kanalopathien relevanter Signalwege unterstützt.

P2X2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen P2RX2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

P2X2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des P2RX2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der P2RX2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen P2X2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native P2RX2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von P2X2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des P2X2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem P2RX2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.