P2P-R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404165-ACT

Das humane Gen **RBBP6** kodiert das Protein **P2P-R**, einen Multi-Domänen-Faktor, der mit p53 sowie Komponenten des Retinoblastom‑Signalwegs assoziiert und dadurch Zellzyklusprogression, Apoptose und transkriptionelle Kontrolle beeinflusst. RBBP6 enthält Motive, die zu Funktionen in der ubiquitinabhängigen Proteinregulation und in der RNA‑Prozessierung passen, wodurch es mit Proteostase- und mRNA‑Reifungsprogrammen verknüpft ist, die die Proliferation koordinieren. Eine veränderte RBBP6‑Aktivität wurde in verschiedenen Kontexten der Tumorbiologie beschrieben, in denen Störungen der p53/RB‑Signalübertragung und der Checkpoint‑Kontrolle häufig sind, was RBBP6 für mechanistische Studien zu Onkogen‑Stressantworten relevant macht. In Zellmodellen kann die Modulation der P2P‑R‑Spiegel genutzt werden, um das Zusammenspiel zwischen DNA‑Schadenssignalgebung, transkriptioneller Regulation und posttranskriptionellem RNA‑Stoffwechsel zu untersuchen.

P2P-R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RBBP6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

P2P-R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RBBP6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RBBP6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen P2P-R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RBBP6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von P2P-R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des P2P-R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RBBP6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.