Plasmide Double Nickase (h) p22-phox: sc-400325-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) p22-phox correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide p22-phox Double Nickase (h) et le plasmide p22-phox Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CYBA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: p22-phox Antibody (E-11): sc-271968
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) p22-phox | sc-400325-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) p22-phox | sc-400325-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYBA code pour p22-phox, une sous-unité transmembranaire de la NADPH oxydase des phagocytes (NOX2), indispensable à l’assemblage correct et à la stabilisation du cœur catalytique gp91-phox/NOX2 ainsi que des facteurs cytosoliques associés. En favorisant le transfert d’électrons vers l’oxygène moléculaire, p22-phox permet une production régulée d’espèces réactives de l’oxygène (ERO/ROS) qui contribue à la défense antimicrobienne, à la signalisation redox et aux réponses inflammatoires. CYBA interagit également avec d’autres enzymes de la famille NOX, le reliant à des voies plus larges dépendantes des ROS qui influencent la fonction endothéliale, la signalisation de l’immunité innée et les réponses au stress oxydant. Une altération génétique ou fonctionnelle de CYBA est associée à des phénotypes de burst oxydatif diminué et a été étudiée dans les contextes d’immunodéficience, d’inflammation chronique et de mécanismes de lésions tissulaires induites par les ROS.
p22-phox Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYBA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYBA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYBA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYBA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.