Plásmido CRISPR de Activación (h) p21-ARC: sc-403677-ACT

ARPC3 codifica p21-ARC, una subunidad esencial del complejo Arp2/3 que nuclea redes ramificadas de filamentos de actina para impulsar la formación de lamelipodios, la protrusión de membrana y la generación de fuerza durante la migración celular. Mediante una regulación coordinada por GTPasas de la familia Rho y por factores promotores de la nucleación como las familias WAVE y WASP, p21-ARC sostiene procesos dependientes de actina, entre ellos la endocitosis, la fagocitosis, el tráfico vesicular y la organización de la sinapsis inmunológica. La alteración de la remodelación del citoesqueleto mediada por Arp2/3 influye en la morfogénesis epitelial, el crecimiento neuronal y la motilidad de leucocitos, lo que vincula la actividad de ARPC3 con mecanismos que se aprovechan con frecuencia en la biología de la invasión y la metástasis. Como regulador central de la actina, ARPC3 se estudia a menudo en vías que controlan la forma celular, la renovación de adhesiones y la mecanotransducción en condiciones normales y relevantes para la enfermedad.

p21-ARC El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ARPC3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

p21-ARC El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ARPC3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ARPC3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de p21-ARC. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ARPC3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de p21-ARC en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía p21-ARC en células tumorales con expresión de ARPC3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.