p130 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422615

概要

マウスRbl2は、レチノブラストーマ様タンパク質p130（RBL2）をコードしている。p130はポケットタンパク質であり、E2F4/5やDREAM複合体と協調して転写を抑制し、細胞周期からの離脱を促す。p130は、CDK-サイクリン活性からのシグナルや、リン酸化依存的なRBファミリー複合体の再編成を統合することで、G0/G1移行、静止状態（quiescence）、および分化プログラムを制御する。これらの経路を通じてRbl2は、チェックポイント制御、クロマチン関連の抑制、系譜の安定性に影響し、増殖制御やがん原性の破綻の研究において重要である。p130を介したE2F抑制を乱すRB経路機能の変化は、がん、細胞老化、組織恒常性のモデルで頻繁に検討されている。

p130 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRbl2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rbl2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rbl2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、p130タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、p130シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rbl2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• p130の機能に不可欠なRbl2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rbl2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• p130 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびp130 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rbl2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  p130 HDRプラスミド（m）および p130 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRbl2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRbl2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。