p107 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422614

概要

マウスRbl1は、レチノブラストーマ（RB）ファミリータンパク質p107をコードしており、E2F転写因子に結合し、サイクリン依存性キナーゼ（CDK）シグナル伝達を協調的に制御することで、G1/S移行を抑制する細胞周期制御因子です。p107は、増殖因子刺激（マイトジェン）由来のシグナルと、DNA複製およびS期進入の転写制御とを統合し、チェックポイントの維持や細胞分化プログラムにも寄与します。RB経路の一部として、p107の機能はpRB/p130のネットワークと交差し、クロマチンに結び付いた転写抑制や増殖の意思決定を調節します。RBファミリーによる制御およびE2F活性の破綻は、がん化（腫瘍化）モデルに広く関連し、哺乳類組織における異常増殖や系譜決定の研究においても重要です。

p107 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRbl1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rbl1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rbl1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、p107タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、p107シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rbl1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• p107の機能に不可欠なRbl1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rbl1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• p107 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびp107 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rbl1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  p107 HDRプラスミド（m）および p107 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRbl1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRbl1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。