OTULIN CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-436617

概要

Otulin は、LUBAC 複合体によって生成される Met1（リニア）結合型ユビキチン鎖を選択的に加水分解する脱ユビキチン化酵素 OTULIN をコードし、ユビキチン依存的なシグナル伝達の伝播を調節します。マウス細胞では、OTULIN は RIPK1 や NEMO/IKBKG など経路構成因子のリニアユビキチン化を制御することで、NF-κB および炎症シグナルの重要な負の制御因子として機能し、サイトカイン応答や細胞死の意思決定に影響します。OTULIN の破綻はプロテオスタシスと免疫恒常性を乱し、この経路を自己炎症性表現型や、より広範な炎症性疾患のメカニズムと結び付けます。OTULIN は自然免疫シグナルやストレス応答とも交差しており、リニアユビキチン編集が受容体刺激により誘導されるシグナルの強度と持続時間を微調整します。

OTULIN CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるOtulin遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Otulin内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Otulinのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、OTULINタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、OTULINシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Otulin欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• OTULINの機能に不可欠なOtulinエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Otulinゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• OTULIN CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびOTULIN CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Otulin遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  OTULIN HDRプラスミド（m）および OTULIN HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはOtulinホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のOtulin標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。