Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
OSX Plasmide Double Nickase (m): sc-431270-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- OSX Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il OSX Double Nickase Plasmid (m) e il OSX Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Sp7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: OSX Antibody (F-3): sc-393325
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
OSX Plasmide Double Nickase (m) | sc-431270-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
OSX Plasmide Double Nickase (m2) | sc-431270-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Sp7 codifica osterix (OSX), un fattore di trascrizione a dita di zinco essenziale per l’impegno e la maturazione della linea osteoblastica a valle dei segnali BMP e Wnt/β-catenina. OSX coordina programmi trascrizionali che controllano la deposizione della matrice extracellulare e la mineralizzazione, inclusa la regolazione di geni quali Bglap, Col1a1 e Alpl. Nello sviluppo e nel rimodellamento osseo, l’attività di Sp7 integra segnali provenienti dai progenitori osteogenici per promuovere la differenziazione, modulando al contempo le interazioni con vie dipendenti da RUNX2. Un’alterata funzione di Sp7/OSX è associata a una ossificazione compromessa e a fenotipi scheletrici, rendendolo rilevante per studi di biologia dell’osso, riparazione delle fratture e disturbi legati all’osteogenesi.
OSX Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sp7 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sp7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sp7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sp7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.