Plasmide Double Nickase (m) osteopontin/OPN/SPP1: sc-423134-NIC

Le gène murin **Spp1** code l’ostéopontine (OPN/SPP1), une phosphoglycoprotéine sécrétée qui agit également au sein de la matrice extracellulaire pour réguler l’adhérence, la migration et la survie cellulaires. L’OPN se lie aux intégrines et à CD44 afin de coordonner la signalisation via les adhérences focales et des voies associées à MAPK/PI3K, modulant ainsi le recrutement des leucocytes, l’activation des macrophages et le remodelage tissulaire. Dans les systèmes murins, **Spp1** est largement utilisé comme marqueur et nœud mécanistique dans l’inflammation, la fibrose, la biologie des ostéoclastes et le remodelage de la niche métastatique. Une expression dérégulée d’OPN/SPP1 est fréquemment étudiée dans des modèles de maladies inflammatoires chroniques, d’interactions tumeur–stroma et de remodelage osseux.

osteopontin/OPN/SPP1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Spp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Spp1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Spp1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Spp1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.