Plasmide CRISPR d'Activation (m) osteopontin/OPN/SPP1: sc-423134-ACT

Le gène murin **Spp1** code l’ostéopontine (OPN/SPP1), une phosphoglycoprotéine sécrétée qui s’associe également à la matrice extracellulaire afin de réguler l’adhésion, la migration et la survie cellulaires. L’OPN transmet des signaux via les intégrines et CD44 pour moduler la dynamique des adhésions focales, le remodelage du cytosquelette et des voies en aval telles que PI3K–AKT, MAPK et NF-κB, orientant les réponses inflammatoires et de remodelage tissulaire. Elle est produite par les cellules de la lignée ostéoblastique, les macrophages et d’autres compartiments stromaux/immuns, contribuant à la minéralisation osseuse, au recrutement des cellules immunitaires et au remodelage matriciel associé à la fibrose. Une expression dérégulée de **Spp1** est fréquemment associée à des troubles inflammatoires, à la biologie de l’invasion et des métastases cancéreuses, ainsi qu’à la physiopathologie squelettique et rénale dans des modèles murins de maladies.

osteopontin/OPN/SPP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Spp1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

osteopontin/OPN/SPP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Spp1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Spp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de osteopontin/OPN/SPP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Spp1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de osteopontin/OPN/SPP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie osteopontin/OPN/SPP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Spp1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.