Plasmide CRISPR d'Activation (h) OSR1: sc-406034-ACT

OSR1 humain (odd-skipped related transcription factor 1) code une protéine à doigts de zinc se liant à l’ADN, qui régule les décisions de destinée cellulaire et les programmes de mise en place des tissus au cours du développement embryonnaire, avec des rôles majeurs dans la spécification du mésoderme intermédiaire et l’organogenèse. OSR1 agit comme régulateur transcriptionnel en s’intégrant à des réseaux géniques pilotés par des morphogènes, notamment des voies influencées par les signalisations WNT et BMP, afin de contrôler la différenciation, la migration et la morphogenèse tissulaire. Une expression altérée d’OSR1 a été associée à des anomalies du développement et à une dérégulation des programmes de lignée dans des contextes pertinents pour la maladie, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le contrôle transcriptionnel de l’identité cellulaire. In vitro, OSR1 est fréquemment étudié dans des modèles de différenciation épithéliale et de développement d’organoïdes, où la dose de facteur de transcription peut remodeler les circuits régulateurs.

OSR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de OSR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OSR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus OSR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription OSR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OSR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus OSR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OSR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OSR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de OSR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.