Plasmide Double Nickase (h) ORP-3: sc-409871-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ORP-3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ORP-3 Double Nickase (h) et le plasmide ORP-3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant OSBPL3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ORP-3 Antibody (G-5): sc-514097
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ORP-3 | sc-409871-NIC | 20 µg | $410.00 |
OSBPL3 code la protéine 3 apparentée aux protéines de liaison aux oxystérols (ORP‑3), une protéine de transfert lipidique qui agit au niveau des sites de contact membranaire afin de coordonner la signalisation des stérols et des phosphoinositides entre organites. ORP‑3 a été associée à la régulation du remodelage du cytosquelette d’actine, de la dynamique des adhésions focales et de la transduction de signaux induite par les récepteurs, via des voies incluant le métabolisme du PI4P/PI(4,5)P2 et, en aval, des programmes de GTPases de la famille Rho. En couplant l’homéostasie lipidique au trafic membranaire et à la motilité cellulaire, ORP‑3 constitue un point d’entrée mécanistique pour étudier comment la détection des lipides influence des états de signalisation dépendants de l’adhésion. Une dysrégulation de l’expression d’OSBPL3 a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques et fait fréquemment l’objet d’études sur la signalisation proliférative, des phénotypes associés à l’invasion et le remodelage membranaire adaptatif au stress.
ORP-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus OSBPL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de OSBPL3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de OSBPL3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de OSBPL3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.