Plasmide Double Nickase (h) OPN1MW: sc-416637-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) OPN1MW correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide OPN1MW Double Nickase (h) et le plasmide OPN1MW Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant OPN1MW. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) OPN1MW | sc-416637-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) OPN1MW | sc-416637-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
OPN1MW code l’opsine sensible aux longueurs d’onde moyennes (opsine M), un récepteur couplé aux protéines G des photorécepteurs coniques qui se lie au 11‑cis‑rétinal et déclenche la phototransduction en réponse à la lumière verte. Une fois activée, elle engage la cascade de signalisation transducine des cônes (GNAT2)–PDE6, diminuant le taux de GMPc et régulant l’activité des canaux ioniques dépendants du GMPc afin de contrôler le potentiel de membrane et la sortie synaptique dans les cônes rétiniens. Une expression et une localisation correctes d’OPN1MW soutiennent la structure du segment externe des cônes et la discrimination des couleurs, ce qui la relie à des processus centraux de la signalisation visuelle et de la physiologie rétinienne. Des variations génétiques ou une dérégulation d’OPN1MW sont associées à des déficits héréditaires de la vision des couleurs et à des phénotypes apparentés touchant la fonction des cônes, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du développement rétinien, du trafic des opsines et de l’intégrité des réseaux de phototransduction.
OPN1MW Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus OPN1MW dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de OPN1MW. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de OPN1MW. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de OPN1MW.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.