OLIG1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402725-ACT

OLIG1 (oligodendrozytärer Transkriptionsfaktor 1) ist ein basischer Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor (bHLH), der im menschlichen zentralen Nervensystem die Festlegung der Oligodendrozyten-Linie, deren Reifung sowie die Expression von Myelingenen reguliert. Er wirkt in entwicklungsbiologischen Transkriptionsnetzwerken zusammen mit verwandten bHLH-Faktoren und kooperiert mit Signalwegen, die Schicksalsentscheidungen neuraler Vorläuferzellen und die gliale Differenzierung koordinieren. OLIG1-abhängige Programme prägen Chromatin- und Transkriptionszustände, die die Remyelinisierungskapazität und zelluläre Reaktionen auf Verletzungen beeinflussen. Eine fehlregulierte OLIG1-Aktivität oder eine veränderte Oligodendrozyten-Differenzierung wurde in demyelinisierenden und neuroentwicklungsbezogenen Zusammenhängen beschrieben, was OLIG1 als Ziel für mechanistische Studien zur Myelinisierung und Glia-Biologie stützt.

OLIG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen OLIG1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OLIG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des OLIG1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der OLIG1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OLIG1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native OLIG1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OLIG1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OLIG1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem OLIG1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.