Plasmide CRISPR d'Activation (m) Olfr1261: sc-434614-ACT

La souris Olfr1261 code un récepteur olfactif appartenant à la famille des GPCR (récepteurs couplés aux protéines G) de classe A de type rhodopsine, qui fonctionne généralement comme détecteur chimiosensoriel en se couplant à la signalisation via les protéines G afin de moduler les voies dépendantes de l’AMPc et l’activité des canaux ioniques en aval dans les neurones olfactifs. Bien que les récepteurs olfactifs soient enrichis dans l’épithélium olfactif, de nombreux membres de cette famille présentent une expression ectopique, ce qui permet d’étudier le trafic des GPCR, leur localisation membranaire et la transduction du signal dépendante du stimulus dans divers contextes cellulaires. La régulation d’Olfr1261 peut éclairer des mécanismes plus larges de choix d’expression des gènes de récepteurs sensoriels, de différenciation neuronale et de contrôle, médié par la chromatine, de vastes clusters de gènes de récepteurs. Une signalisation GPCR dérégulée et des profils d’expression modifiés des récepteurs chimiosensoriels ont été associés à des changements de l’inflammation, du métabolisme et de la biologie tumorale, ce qui soutient des recherches exploratoires sur des rôles non canoniques des récepteurs olfactifs, sans pour autant impliquer de retombées cliniques.

Olfr1261 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Olfr1261 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Olfr1261 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Olfr1261 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Olfr1261, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Olfr1261. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Olfr1261 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Olfr1261 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Olfr1261 dans les cellules tumorales présentant une expression de Olfr1261 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.