ODC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401055

Visão geral

ODC1 codifica a ornitina descarboxilase (ODC), a enzima limitante da velocidade na biossíntese de poliaminas, que converte ornitina em putrescina, sustentando a produção de espermidina e espermina, necessárias para a replicação do DNA, a organização da cromatina e a tradução. A atividade da ODC é rigidamente controlada pela degradação mediada por antizima e integra-se ao metabolismo de aminoácidos, à sinalização de crescimento ligada ao mTOR e à progressão do ciclo celular. A desregulação do metabolismo de poliaminas e o aumento da expressão de ODC1 estão frequentemente associados a fenótipos proliferativos, adaptação metabólica e programas transcricionais oncogénicos, tornando ODC1 um nó útil para estudar o controlo do crescimento e as respostas ao stress. A perturbação de ODC1 também contribui para pesquisas sobre apoptose, amortecimento do stress oxidativo e sinalização imune ou inflamatória, nas quais as poliaminas modulam a expressão génica e a aptidão celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ODC (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ODC1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ODC1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ODC1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ODC.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ODC1 para a investigação da sinalização de ODC, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ODC1 críticos para a função ODC
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ODC1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ODC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ODC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ODC1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ODC Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ODC (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ODC1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ODC1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.