Plasmide Double Nickase (h) Oct3/4: sc-410951-NIC

POU5F1B code un facteur de transcription humain à domaine POU apparenté à Oct3/4, impliqué dans la régulation des programmes transcriptionnels associés à la pluripotence ainsi que de l’état de la chromatine. L’activité de la famille Oct3/4 s’articule avec les réseaux centraux de « stemness » et les circuits transcriptionnels gouvernant l’auto-renouvellement, l’engagement de lignée et la reprogrammation, avec des effets en aval sur le contrôle du cycle cellulaire et le remodelage épigénétique. Une expression aberrante ou une dérégulation de POU5F1B a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et fait l’objet d’études en lien avec des programmes transcriptionnels oncogéniques, la plasticité cellulaire et des phénotypes d’adaptation au stress. Ce gène est donc pertinent pour disséquer les mécanismes des états de type cellule souche, les barrières à la différenciation et la biologie des maladies pilotée par des facteurs de transcription dans des modèles cellulaires humains.

Oct3/4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus POU5F1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de POU5F1B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de POU5F1B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de POU5F1B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.