Plásmido Doble Nickase (h) Ob-R/Leptin Receptor: sc-400315-NIC

LEPR codifica Ob-R, el receptor de leptina, un receptor de citocinas de clase I que media el control dependiente de leptina del balance energético, la función neuroendocrina y la homeostasis metabólica. La unión del ligando promueve la activación de JAK2 asociada al receptor y la señalización aguas abajo de STAT3/STAT5, con acoplamiento adicional a las vías PI3K–AKT y MAPK, que influyen en programas transcripcionales, la excitabilidad celular y la detección de nutrientes. La señalización de LEPR también se interconecta con la retroalimentación negativa mediada por SOCS3 y con mediadores inflamatorios que modulan las respuestas hipotalámicas y periféricas a las señales de adiposidad. Las alteraciones genéticas y funcionales de LEPR están estrechamente vinculadas a fenotipos relacionados con la obesidad y a la desregulación metabólica, y se estudian ampliamente en modelos relevantes de tejido adiposo, sistema inmune y sistema nervioso central.

Ob-R/Leptin Receptor El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LEPR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LEPR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LEPR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LEPR alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.