OAT3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422696

概要

Slc22a8は有機アニオントランスポーター3（OAT3）をコードしており、基底側膜に局在する多基質性の取り込みトランスポーターとして、さまざまな内因性代謝物や異物性の有機アニオンを細胞内へ取り込みます。マウス腎近位尿細管では、OAT3が血液側からの取り込みを下流の管腔側（頂端膜）の排出トランスポーターへとつなぐことで方向性のある分泌を支え、多くの低分子化合物の腎クリアランスや全身曝露に影響を与えます。有機アニオン交換や細胞内代謝物の取り扱いに関与することで、OAT3は溶質恒常性に寄与し、尿細管輸送、尿毒素の処理、腎毒性への感受性に関わる経路とも交差します。OAT3活性の変化は腎障害の機序や薬物動態の個体差に関与すると示唆されており、Slc22a8はトランスポーター依存的な表現型をモデル化するうえで有用な遺伝子座です。

OAT3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSlc22a8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Slc22a8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Slc22a8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、OAT3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、OAT3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Slc22a8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• OAT3の機能に不可欠なSlc22a8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Slc22a8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• OAT3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびOAT3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Slc22a8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  OAT3 HDRプラスミド（m）および OAT3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSlc22a8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSlc22a8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。