nucleobindin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405167

概要

NUCB1は、分泌経路に局在するカルシウム結合タンパク質であるヌクレオビンディンをコードし、Ca2+依存的な細胞内輸送およびタンパク質ソーティングの制御に関与します。NUCB1は、EFハンドモチーフや管腔側カーゴとの相互作用を介して、ゴルジ体／小胞体（ER）の恒常性、小胞輸送、ならびにストレスに適応した分泌応答と関連づけられてきました。NUCB1の発現変化は、プロテオスタシスの破綻や細胞ストレスシグナル伝達の異常を伴うさまざまな状況で報告されており、分泌機構、膜動態、Ca2+制御経路のメカニズム研究において重要です。さらに、分泌異常、タンパク質凝集、あるいはオルガネラのストレス応答が病態生理に寄与する疾患モデルにおいても、NUCB1依存的プロセスが検討されています。

nucleobindin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNUCB1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NUCB1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NUCB1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、nucleobindinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、nucleobindinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NUCB1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• nucleobindinの機能に不可欠なNUCB1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NUCB1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• nucleobindin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびnucleobindin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NUCB1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  nucleobindin HDRプラスミド（h）および nucleobindin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNUCB1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNUCB1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。