NTE CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406850

概要

PNPLA6は、神経障害標的エステラーゼ（neuropathy target esterase：NTE）をコードしており、ホスファチジルコリンを加水分解してリン脂質恒常性を調節する、膜結合性のホスホリパーゼ／リゾホスホリパーゼです。NTE活性は、生理活性リゾリン脂質の量を制御することで、小胞体膜の完全性、脂肪滴の動態、ならびにニューロンの維持を支えます。PNPLA6の機能が損なわれると、膜リモデリングや脂質シグナル伝達経路が乱れ、これらは軸索の安定性やシナプス機能と密接に関連する過程です。PNPLA6の遺伝的変異は神経変性および神経発達の表現型と関連しており、脂質によって駆動される神経細胞脆弱性の機構を研究するうえで有用な遺伝子座となっています。

NTE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPNPLA6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PNPLA6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PNPLA6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NTEタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NTEシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PNPLA6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NTEの機能に不可欠なPNPLA6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PNPLA6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NTE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNTE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PNPLA6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NTE HDRプラスミド（h）および NTE HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPNPLA6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPNPLA6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。