Plasmide CRISPR d'Activation (h2) NRF-1: sc-400938-ACT-2

Le gène humain NRF1 code le facteur respiratoire nucléaire 1 (NRF‑1), un facteur de transcription spécifique de séquence qui coordonne l’expression de gènes mitochondriaux codés par le noyau, notamment des composants de la chaîne de transport des électrons, la machinerie de transcription/réplication mitochondriale (p. ex., TFAM) et des facteurs soutenant la phosphorylation oxydative ainsi que la biogenèse mitochondriale. NRF‑1 intègre les signaux liés à l’énergie et à l’état rédox cellulaires aux programmes de croissance cellulaire en régulant des réseaux transcriptionnels associés à la protéostase, à la biosynthèse de l’hème et à la communication mitochondrie–noyau, influençant ainsi le remodelage métabolique et l’adaptation au stress. Une activité dérégulée de NRF1/NRF‑1 a été associée à une dysfonction mitochondriale et à des altérations de la bioénergétique observées dans des contextes de neurodégénérescence, de troubles cardiométaboliques et de cancer. L’édition génomique ou la perturbation de NRF1 permet des études mécanistiques de la régulation des gènes mitochondriaux, de la capacité respiratoire et des circuits transcriptionnels dans des modèles de cellules humaines, notamment la cartographie de voies et des analyses génotype–phénotype à l’aide de lectures omiques.

NRF-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NRF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NRF-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NRF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NRF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NRF-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NRF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NRF-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NRF-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NRF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.