NRAMP 2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-418176-LAC

SLC11A2 kodiert NRAMP2 (DMT1), einen protonengekoppelten Transporter für zweiwertige Metallionen, der die zelluläre Aufnahme und den endosomalen Export von zweiwertigem Eisen (Fe²⁺) und anderen Übergangsmetallen vermittelt. NRAMP2 ist zentral für die intestinale Eisenresorption und die Freisetzung von Eisen aus dem Transferrin-Zyklus in Endosomen und verbindet es damit mit Endozytose, vesikulärer Ansäuerung und Signalwegen der Metallhomöostase, die den mitochondrialen Stoffwechsel und Reaktionen auf oxidativen Stress beeinflussen. Eine Fehlregulation von SLC11A2 ist mit einer erblichen mikrozytären Anämie mit Eisenüberladung assoziiert und trägt zu Phänotypen der Eisenverarbeitung bei, die für Neurodegeneration, Entzündung und metabolischen Stress relevant sind. Als Membrantransporter mit kontextabhängiger Regulation wird NRAMP2 häufig in Modellen der Nährstoffsensorik, der Redoxbiologie und der Wirt–Pathogen-Interaktionen untersucht, in denen die Verfügbarkeit von Metallen die Zellfunktion prägt.

NRAMP 2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SLC11A2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NRAMP 2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SLC11A2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NRAMP 2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SLC11A2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.