Plasmide Double Nickase (h) NR5A2: sc-402656-NIC

NR5A2 (nuclear receptor subfamily 5 group A member 2 ; LRH-1) est un facteur de transcription appartenant aux récepteurs nucléaires orphelins, qui se lie à des éléments de réponse hormonale afin de réguler des programmes géniques contrôlant l’homéostasie du cholestérol et des acides biliaires, la stéroïdogenèse et le métabolisme lipidique. Dans les contextes épithéliaux, NR5A2 soutient également les états prolifératifs et de différenciation en intégrant des signaux issus des récepteurs nucléaires avec des réseaux transcriptionnels métaboliques et développementaux. Son activité croise des voies impliquées dans la fonction pancréatique et hépatique, et des altérations de l’expression de NR5A2 ou des variants régulateurs ont été associées à des phénotypes pertinents pour la maladie, notamment l’inflammation et une reprogrammation transcriptionnelle liée au cancer. En tant que régulateur associé à la lignée cellulaire et au métabolisme, NR5A2 est fréquemment étudié dans des modèles de biologie gastro-intestinale, hépatique et pancréatique, ainsi que dans des analyses des circuits transcriptionnels.

NR5A2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NR5A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NR5A2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NR5A2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NR5A2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.