Plásmido CRISPR de Activación (h) NQO2: sc-402200-ACT

La NQO2 humana (NRH:quinona oxidorreductasa 2) codifica una flavoproteína citosólica que cataliza la reducción de dos electrones de quinonas y electrófilos relacionados, influyendo en el equilibrio redox celular y en la capacidad de desintoxicación. Al modular el ciclado de quinonas y la formación de especies reactivas de oxígeno, NQO2 se relaciona con las respuestas al estrés oxidativo, el metabolismo de xenobióticos y redes redox más amplias dependientes de NAD(P)H. La alteración de la expresión y la actividad de NQO2 se ha asociado con fenotipos vinculados al estrés metabólico, la inflamación y la susceptibilidad celular al daño mediado por electrófilos, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de adaptación al estrés. En la biología del cáncer y la investigación en neurobiología, NQO2 suele estudiarse en el contexto de la homeostasis redox, la sensibilidad al daño del ADN y los cambios de señalización impulsados por metabolitos electrófilos.

NQO2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NQO2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NQO2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NQO2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NQO2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NQO2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NQO2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NQO2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NQO2 en células tumorales con expresión de NQO2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.