Plasmide CRISPR d'Activation (h) NPY2-R: sc-417895-ACT

NPY2R code le récepteur humain Y2 du neuropeptide Y (NPY2-R), un RCPG couplé à Gi/o qui se lie au neuropeptide Y et au peptide YY pour moduler la signalisation de l’AMPc, l’activité des canaux ioniques et la dynamique en aval de la voie MAPK/ERK. NPY2-R est largement impliqué dans la régulation neuroendocrinienne, en influençant la transmission synaptique, la réactivité au stress et les circuits liés à l’appétit, et il contribue également à la physiologie vasculaire et gastro-intestinale. Via la neurotransmission inhibitrice et le contrôle présynaptique de la libération de peptides, NPY2R influence l’excitabilité cellulaire et l’homéostasie métabolique. Une dérégulation de la signalisation NPY2R a été associée à des phénotypes liés à l’équilibre énergétique, aux voies de l’humeur et du stress, ainsi qu’à des processus inflammatoires ou autonomes, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles cellulaires neuronaux et périphériques.

NPY2-R Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NPY2R sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NPY2-R Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NPY2R dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NPY2R, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NPY2-R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NPY2R natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NPY2-R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NPY2-R dans les cellules tumorales présentant une expression de NPY2R silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.