Npl4 Double Nickase Plasmid (h): sc-403787-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Npl4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Npl4 Double-Nickase-Plasmid (h) und Npl4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NPLOC4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Npl4: sc-365796
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Npl4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403787-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Npl4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403787-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NPLOC4 kodiert Npl4, einen zentralen Kofaktor des p97/VCP-AAA+-ATPase-Komplexes, der polyubiquitinierte Substrate erkennt und die ubiquitinabhängige Extraktion mit dem proteasomalen Abbau koppelt. Über seine Funktion in der ER-assoziierten Degradation (ERAD), der ribosomenassoziierten Qualitätskontrolle und dem chromatinhängigen Proteinumsatz trägt Npl4 dazu bei, die Proteostase unter zellulärem Stress aufrechtzuerhalten und die Genomstabilität zu unterstützen. Eine Störung der p97–UFD1–Npl4-Achse beeinträchtigt die Ubiquitin-Signalgebung und kann die Reaktionen auf proteotoxischen Stress, Anforderungen an die DNA-Reparatur und den Zellzyklusverlauf verändern, was NPLOC4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Netzwerken der Proteinkontrolle macht. Eine fehlregulierte Steuerung dieses Signalwegs wurde in experimentellen Systemen mit neurodegenerations- und krebsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht – über Effekte auf die Protein-Homöostase und stressadaptive Signalgebung.
Npl4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NPLOC4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NPLOC4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NPLOC4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NPLOC4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.