NPAS4 Lentiviral Activation Particles (m): sc-432569-LAC

Das Mausgen **Npas4** kodiert **NPAS4**, einen aktivitätsabhängigen bHLH-PAS-Transkriptionsfaktor, der neuronale Erregung mit Genprogrammen koppelt, die die Entwicklung inhibitorischer Synapsen und das Gleichgewicht zwischen Erregung und Hemmung steuern. NPAS4 wird durch Kalziumsignalgebung induziert und ist an Transkriptionsnetzwerken beteiligt, die synaptische Plastizität, die Verfeinerung neuronaler Schaltkreise und homöostatische Antworten auf veränderte neuronale Aktivität prägen. Durch die Regulation nachgeschalteter Zielgene, die mit der Modulation GABAerger Synapsen und stimulusabhängiger Transkription verknüpft sind, beeinflusst NPAS4 die Stressreaktivität, lernbezogene Plastizität und metabolische Anpassung in neuralen Geweben. Fehlregulierte, NPAS4-assoziierte Signalwege wurden im Kontext neuropsychiatrischer und neurodegenerativer Krankheitsmechanismen untersucht, darunter veränderte Netzwerk-Erregbarkeit und beeinträchtigte kognitive Funktion.

NPAS4 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Npas4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NPAS4 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Npas4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NPAS4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Npas4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.