NP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403815-ACT

NPTX2 kodiert Neuronal Pentraxin‑2 (NP2), ein sezerniertes synaptisches Protein, das an aktivitätsabhängigem synaptischem Remodeling und der Reifung exzitatorischer Schaltkreise beteiligt ist. NP2 wirkt in durch neuronale Aktivität regulierten Signalwegen, die die Clusterbildung synaptischer Rezeptoren und Interaktionen mit der extrazellulären Matrix beeinflussen, und unterstützt damit Prozesse wie Synaptogenese, Plastizität und Netzwerkstabilität. Eine veränderte NPTX2-Expression wird mit der Biologie neurodegenerativer und neuropsychiatrischer Erkrankungen in Verbindung gebracht, bei denen synaptische Dysfunktion und ein gestörtes exzitatorisch‑inhibitorisches Gleichgewicht häufige Merkmale sind. Als molekularer Indikator neuronaler Aktivität und synaptischer Integrität wird NP2 häufig in Modellen des Schaltkreis‑Remodelings, von Stressantworten und von entzündungsassoziierten synaptischen Veränderungen untersucht.

NP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NPTX2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NPTX2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NPTX2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NPTX2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NPTX2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.