Notum CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409374

概要

NOTUM は Notum をコードしており、Notum は分泌型のカルボキシルエステラーゼとして、Wnt リガンドに付加されたパルミトレイン酸（palmitoleate）修飾を脱アシル化することで Wnt シグナル伝達を負に制御します。これにより、リガンド–受容体の結合と、その下流にある β-カテニン依存性転写が抑制されます。Notum は Wnt 勾配の形成やシグナル持続時間を調節することで、発生時のパターニング、組織恒常性、幹細胞ニッチの制御に寄与します。NOTUM 活性の変化は、がんを含む複数の疾患状況や、上皮の更新・分化が異常となる病態などで観察される Wnt 経路出力の破綻と関連づけられています。可溶性の Wnt アンタゴニストとして、Notum は細胞外マトリックス近傍のシグナル伝達や、パラクラインによる経路活性化制御の研究においても重要です。

Notum CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNOTUM遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NOTUM内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NOTUMのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Notumタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Notumシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NOTUM欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Notumの機能に不可欠なNOTUMエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NOTUMゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Notum CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNotum CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NOTUM遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Notum HDRプラスミド（h）および Notum HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNOTUMホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNOTUM標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。