Plasmide Double Nickase (m) Notch1: sc-421930-NIC

Notch1 chez la souris code un récepteur transmembranaire à passage unique qui assure la signalisation canonique Notch afin de contrôler les décisions de destinée cellulaire, le maintien des cellules souches et progénitrices, ainsi que les programmes de différenciation au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire. La liaison d’un ligand déclenche un clivage protéolytique et la libération du domaine intracellulaire de Notch, qui se transloque dans le noyau et coopère avec RBPJ/CSL et des coactivateurs tels que MAML pour réguler des réseaux transcriptionnels, notamment des cibles des familles HES et HEY. Notch1 s’intègre à des voies qui gouvernent la prolifération, l’apoptose et l’engagement de lignée, et sa dérégulation est associée à des altérations du développement des cellules immunitaires et à des processus tumorigènes dans de nombreux tissus. Dans les modèles murins, la perturbation de Notch1 est largement utilisée pour étudier des phénotypes développementaux, la régulation hématopoïétique et les signaux du microenvironnement qui façonnent l’organisation des tissus.

Notch1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Notch1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Notch1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Notch1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Notch1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.