Plasmide CRISPR d'Activation (h) Notch1: sc-400167-ACT

Le gène humain **NOTCH1** code le récepteur transmembranaire Notch1, médiateur central de la signalisation Notch juxtacrine, qui régit les décisions de destinée cellulaire, la prolifération et la différenciation au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire. La liaison du ligand déclenche un traitement protéolytique et la libération du domaine intracellulaire de Notch, qui se transloque dans le noyau pour réguler des programmes transcriptionnels contrôlant la spécification des lignages et le maintien des cellules souches/progénitrices. L’activité de Notch1 s’entrecroise avec des voies telles que WNT/β-caténine, NF-κB, PI3K–AKT et TGF-β afin de coordonner des réponses transcriptionnelles dépendantes du contexte. Une signalisation **NOTCH1** dérégulée est impliquée dans la biologie des cancers, le développement des cellules immunitaires, ainsi que des processus cardiovasculaires et neurodéveloppementaux, ce qui souligne sa large pertinence pour les études mécanistiques.

Notch1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NOTCH1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Notch1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NOTCH1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NOTCH1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Notch1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NOTCH1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Notch1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Notch1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NOTCH1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.