Notch 4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421934

概要

Notch4はNotchファミリーに属する単回膜貫通型受容体をコードしており、細胞間接触依存的なシグナル伝達を介して、細胞運命決定、増殖、分化を制御します。Delta-likeまたはJaggedタンパク質によるリガンド結合を受けると、受容体がプロテオリシスを受けてNotch細胞内ドメインが放出され、RBPJ/CSLおよび共活性化因子と協調して転写プログラムを制御します。マウス組織では、Notch4は血管・内皮の生物学と強く関連しており、VEGF、Wnt、TGF-βなどの経路とのクロストークを通じて、血管新生の挙動や血管成熟に影響を与えます。Notch4シグナルの制御破綻は、異常な血管リモデリングや腫瘍関連血管新生と関連づけられており、発生および疾患に関連するシグナルネットワークの機構研究において重要です。

Notch 4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNotch4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Notch4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Notch4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Notch 4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Notch 4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Notch4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Notch 4の機能に不可欠なNotch4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Notch4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Notch 4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNotch 4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Notch4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Notch 4 HDRプラスミド（m）および Notch 4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNotch4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNotch4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。