Notch 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421933

概要

Notch3 は Notch 3 受容体をコードしており、これは 1 回膜貫通型の膜タンパク質で、隣接細胞間（ジャクスタクリン）シグナル伝達を介して、状況依存的に細胞運命の決定、増殖、分化を制御します。リガンドが結合すると受容体がプロセシングを受け、Notch の細胞内ドメインが放出されます。これが核へ移行し、CSL/RBPJ と共活性化因子とともに転写プログラムを制御します。マウス組織では、Notch3 は血管平滑筋細胞／ペリサイトの生物学と強く関連し、血管の成熟、組織恒常性、ストレス応答に寄与します。Notch3 シグナルの制御異常は、異常な分化状態や血管病変と関連づけられており、Notch 経路のクロストークや系譜制御を研究するうえで重要な標的となります。

Notch 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNotch3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Notch3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Notch3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Notch 3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Notch 3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Notch3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Notch 3の機能に不可欠なNotch3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Notch3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Notch 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNotch 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Notch3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Notch 3 HDRプラスミド（m）および Notch 3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNotch3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNotch3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。