Nogo CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-427106

概要

Rtn4はNogoをコードしており、Nogoは小胞体に局在するレチキュロンで、管状小胞体膜の形態形成に関与し、ニューロンおよびグリアにおけるオルガネラ恒常性の維持に寄与します。Nogoのアイソフォームは、軸索誘導や再生に関連するシグナル伝達経路や細胞骨格ダイナミクスを調節することで、神経突起の伸長やシナプス可塑性にも影響を与えます。中枢神経系では、Nogoによる神経突起伸長の阻害は、損傷後や神経変性の過程において神経回路の再編が制限される機構に関連します。そのため、マウスのRtn4/Nogoは、軸索伸長制御、髄鞘化に伴うシグナル伝達、ならびに小胞体構造と連動したストレス応答のモデルにおいて広く研究されています。

Nogo CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRtn4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rtn4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rtn4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Nogoタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Nogoシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rtn4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Nogoの機能に不可欠なRtn4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rtn4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Nogo CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNogo CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rtn4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Nogo HDRプラスミド（m）および Nogo HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRtn4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRtn4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。