Nogo Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427106
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Nogo El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Nogo, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Nogo Anticuerpo (C-4): sc-271878
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Nogo Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-427106 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Rtn4 codifica Nogo, un reticulón asociado al retículo endoplásmico que da forma a las membranas tubulares del RE y contribuye a la homeostasis de los orgánulos en neuronas y glía. Las isoformas de Nogo también influyen en el crecimiento de neuritas y la plasticidad sináptica al modular la dinámica del citoesqueleto y las vías de señalización vinculadas a la guía y regeneración axonal. En el sistema nervioso central, la inhibición de la extensión de neuritas mediada por Nogo es relevante para los mecanismos que limitan la remodelación neuronal tras una lesión y durante la neurodegeneración. Por ello, el Rtn4/Nogo de ratón se estudia ampliamente en modelos de control del crecimiento axonal, señalización asociada a la mielinización y respuestas al estrés acopladas a la estructura del RE.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nogo (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rtn4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rtn4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rtn4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nogo.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rtn4 para la investigación de la señalización de Nogo, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Rtn4 críticos para la función de Nogo
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rtn4 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Nogo CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Nogo CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rtn4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nogo (m) y el plásmido HDR Nogo (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rtn4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rtn4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.